Molecular survey of flaviviruses and orthobunyaviruses in Amblyomma spp. ticks collected in Minas Gerais, Brazil / Investigação molecular de flavivírus e orthobunyaviruses em carrapatos do gênero Amblyomma spp. coletados em Minas Gerais, Brasil

Abstract Due to anthropic environmental changes, vector-borne diseases are emerging worldwide. Ticks are known vectors of several pathogens of concern among humans and animals. In recent decades, several examples of tick-borne emerging viral diseases have been reported (Crimean Congo hemorrhagic fever virus, Powassan virus, encephalitis virus, heartland virus, severe fever with thrombocytopenia syndrome virus). Unfortunately, few studies addressing the presence of viruses in wild ticks have been carried out in South America. With the aim of detecting flaviviruses and orthobunyaviruses in ticks, we carried out molecular detection in wild ticks collected in the state of Minas Gerais, Brazil. No Flavivirus-positive ticks were detected; however, we detected activity of Orthobunyavirus in 8 Amblyomma tick specimens. One of those individuals was positive for Bunyamwera orthobunyavirus, which represents the first report of this virus among ticks in South America. Further studies related to the ecology of zoonotic diseases are needed to increase knowledge of this topic, including attempts at viral isolation, full genome sequencing and biological characterization. In this way, we will obtain a better picture of the real risk of ticks as a vector for viral diseases for humans and animals on our continent, where no tick-borne viral disease is known to occur.

Resumo Alterações ambientais causadas pelo homem têm levado à emergência de doenças transmitidas por vetores no mundo. Carrapatos são vetores conhecidos de vários patógenos de importância médica e veterinária, tendo sido reportado nas últimas décadas um grande número de enfermidades virais emergentes transmitidas por eles (vírus da Febre Hemorrágica da Crimeia-Congo, vírus Powassan, vírus da Encefalite, vírus Heartland e vírus da Síndrome da Febre Trombocitopênica Severa). Infelizmente, poucos estudos envolvendo a pesquisa de vírus em carrapatos foram conduzidos na América do Sul até o momento, e nas últimas décadas um elevado número de enfermidades virais emergentes transmitidas por estes artrópodes foi relatado. Com o objetivo de investigar a presença de flavivírus e orthobunyavírus em carrapatos, foi conduzida uma análise molecular em espécimes coletados no estado de Minas Gerais, Brasil. Em nenhum carrapato foi detectada a presença de Flavivirus, no entanto, em 8 espécimes do gênero Amblyomma, foi detectada a presença de Orthobunyavirus, dos quais um espécime foi positivo para Bunyamwera orthobunyavirus. Novos estudos relacionados à ecologia de doenças zoonóticas, incluindo tentativas de isolamento viral, sequenciamento completo do genoma e caracterização biológica, são necessários. Desta forma, será possível ter uma base sobre os riscos da transmissão de vírus patogênicos por carrapatos em nosso continente, uma vez que até agora isso é desconhecido.

Detección de Borrelia burgdorferi sensu lato en perros y sus garrapatas en comunidades rurales de Yucatán, México / Detection of Borrelia burgdorferi sensu lato in dogs and its ticks in rural communities of Yucatán, Mexico

Resumen Actualmente, el estudio de la borreliosis canina adquiere mayor relevancia, ya que el perro es considerado como un importante centinela del complejo Borrelia burgdorferi sensu lato, el cual podría desempeñar un papel clave en la dispersión de garrapatas de las áreas selváticas al ambiente doméstico. En México, la distribución y presencia de genoespecies patógenas de B. burgdorferi en perros y sus garrapatas aún no ha sido investigada. Por tal motivo, la presente investigación tiene como objetivo detectar y estimar la prevalencia de B burgdorferi s.l. en perros y sus garrapatas en dos comunidades rurales de Yucatán, México. En cada comunidad se visitaron 50 viviendas donde se estudiaron 144 muestras de sangre de perros por punción de la vena safena, así como la colecta de sus garrapatas. Se colectaron un total de 846 garrapatas de las especies Ixodes affinis (33 / 846), Rhipicephalus sanguineus sensu lato (786 / 846) y Amblyomma mixtum (27 / 846). Para detectar la presencia de B. burgdorferi s.l. en dichas muestras, se amplificó el gen conservado flaB y las lipoproteínas de membrana externa, ospC y p66, mediante el uso de la reacción en cadena de la polimerasa. La prevalencia obtenida en sangre de perros fue de 17.3 % (25 / 144) para flaB, 12.50 % (18 / 144) para el gen p66 y 1.38 % (2 / 144) para el gen ospC. De las garrapatas analizadas, R. sanguineus s.l. tuvo una prevalencia de infección de 0.89 %, A. mixtum de 5.88 % e I. affinis de 15.15 %, siendo esta última especie la que presentó mayor prevalencia. Dos perros y sus garrapatas I. affinis fueron positivos al gen flaB. Solamente una garrapata R. sanguineus s.l. fue positiva al gen p66 y ninguna especie de garrapata fue positiva al gen ospC. Este estudio confirma la existencia de B. burgdorferi s.l. en perros y sus garrapatas en comunidades rurales de Yucatán, México. La detección de Borrelia en perros podría ser un criterio importante para la evaluación del riesgo de borreliosis en humanos, ya que el perro puede emplearse como indicador epidemiológico para la identificación de nuevos focos de esta enfermedad.

Abstract In Mexico, the distribution and the presence of pathogenic genospecies of B. burgdorferi in dogs and their ticks has not been extensively investigated. The study of canine borreliosis is acquiring greater relevance, since the dog is considered to be an important sentinel for pathogens pertaining to the complex Borrelia burgdorferi sensu lato; in addition, dogs could be playing a key role in the spread of ticks from forested areas into the domestic environment. This study aimed to detect and estimate the prevalence of B. burgdorferi s.l. in dogs and their ticks in two rural communities of Yucatán, Mexico. In each community, 50 houses were visited, where 144 blood samples from dogs were studied by puncture of the saphenous vein, as well as the collection of their ticks. To detect the presence of B. burgdorferi s.l. in these samples, the conserved gene flaB, p66 and ospC were PCR amplified. A total of 144 dog blood samples, and 846 of ticks were obtained from the examined animals. Considering tick species, Rhipicephalus sanguineus sensu lato (786 / 846) was common, while Ixodes affinis (33 / 846), and Amblyomma mixtum (27 / 846) resulted less frequent. As per gene conservation, the prevalence of B. burgdorferi in canine blood was 17.3 % (25 / 144) to flaB, 12.50 % (18 / 144) for p66 and 1.38 % (2 / 144) for the ospC gene. Within the analyzed ticks, R. sanguineus s.l. had a prevalence of 0.89 %, A. mixtum 5.88 % and I. affinis 15.15 %, being this last species the one that presented higher prevalence. Two dogs and their ticks I. affinis were positive to the flaB gene. Only a tick R. sanguineus s.l. was positive to the gene p66 and no tick species was positive the ospC gene. This study confirmed the existence of B. burgdorferi s.l. in dogs and their ticks in rural communities of Yucatán, Mexico. The detection of Borrelia in dogs may be an important criterion for the evaluation of the risk of borreliosis in humans, since the dog can be used as an epidemiological indicator for the identification of new outbreaks of this disease. Rev. Biol. Trop. 66(1): 428-437. Epub 2018 March 01.

Fiebre manchada grave por Rickettsia rickettsii en turista en el Noroeste Argentino / Severe spotted fever by Rickettsia rickettsii, in tourist in the Argentine Northwest

Al quinto día de retirarse del Parque Nacional El Rey, provincia de Salta, Argentina, donde realizó turismo rural, una mujer italiana de 47 años desarrolló un cuadro febril agudo seguido de un exantema petequial y purpúrico que progresó rápidamente a falla multiorgánica y falleció al sexto día de internación. Existieron referencias a mordeduras por garrapatas y se constató una lesión cutánea similar a la denominada tache noire. La autopsia mostró una vasculitis generalizada, ascitis, edema de pulmón, necrosis tubular aguda y necrosis portal centrolobulillar. Se procesó tejido esplénico y hepático con técnica de PCR para Rickettsia spp, basada en la detección del gen gltA. El resultado fue positivo. Los amplicones obtenidos fueron secuenciados y los resultados se compararon con las secuencias preestablecidas en el programa BLAST, coincidiendo en un 99% con R. rickettsii. La baja sensibilidad del sistema de salud en reconocer la enfermedad y la insuficiente información producida desde los medios relacionados con el turismo, son factores que inciden en el retardo de implementar un tratamiento eficaz y las normas de prevención adecuadas.

On the fifth day after leaving the Parque Nacional El Rey, province of Salta, Argentina, where she made rural tourism, a woman of Italian origin, aged 47, developed an acute fever followed by a petechial and purpuric rash that progressed rapidly to multiorgan failure. She died on the sixth day after hospitalization. There were references to tick bites and a skin lesion similar to tache noire was found. The autopsy showed generalized vasculitis, ascites, pulmonary edema, acute tubular necrosis and portal centrilobular necrosis. Spleen and liver tissue were processed for PCR Rickettsia spp, based on the detection of the gltA gene. The result was positive. The amplicons obtained were sequenced and the results were compared with the preset sequences on the BLAST program, 99% coinciding with R. rickettsii. The low sensitivity of the health system to recognize this disease and the insufficient information generated from tourism-related media are factors that affect the delay to implement effective treatment and appropriate prevention standards.

Serosurvey of antibodies against spotted fever group Rickettsia spp. in horse farms in Northern Paraná, Brazil / Soroprevalência de anticorpos contra Rickettsia spp. do grupo febre maculosa em equinos de haras no Norte do Paraná, Brasil

Brazilian spotted fever (BSF) is an emerging disease most likely caused by Rickettsia rickettsii. The objective of the present study was to estimate the seroprevalence of BSF rickettsia infections in equines from six horse farms located in Londrina County, Paraná, Southern Brazil. Six owners of horse farms situated in Cambé, Santa Fé, Guaraci and Londrina municipalities participated in the study. All farms were located in areas where BSF has not been reported. A total of 273 horses were sampled and their sera were tested by indirect Immunofluorescence assay (IFA) using R. rickettsii and R. parkeri antigens. Titers equal to and greater than 64 were considered positive. Of 273 sera tested, 15 (5.5 percent) reacted to R. rickettsii and 5 (1.8 percent) to R. parkeri. Five out of the six farms studied revealed seropositive animals and seropositivity rate ranged from 0 to 13 percent. The titers ranged from 64 to 512, and four samples had a titer of 512. Nine animals reacted to R. rickettsii with titers four-fold higher than those for R. parkeri. These results suggest that horses in Northern Paraná may have been exposed to rickettsiae identical or closely related to R. rickettsii.

Febre Maculosa Brasileira (FMB) é uma doença emergente, sendo Rickettsia rickettsii o seu principal agente etiológico. O objetivo deste estudo foi determinar a soroprevalência de rickettsia do grupo da febre maculosa em equinos de seis haras localizados nos municípios de Cambé, Santa Fé, Guaraci e Londrina. As propriedades eram localizadas na região Norte do Paraná onde casos de FMB ainda não foram diagnosticados. Foram colhidas amostras de sangue de 273 equinos, e os soros foram testados pela RIFI, usando R. rickettsii e R. parkeri como antígenos, considerando-se como positivos títulos >64. Entre 273 soros, 15 (5,5 por cento) reagiram contra R. rickettsii e 5 (1,8 por cento) para R. parkeri. Cinco de seis haras estudados tinham animais reativos, e a taxa de sororreatividade variou de 0 a 13 por cento. Os títulos variaram de 64 para 512, e três amostras apresentaram título de 512. Nove animais reagiram para R. rickettsii com títulos quatro vezes maiores que para R. parkeri. Esses resultados sugerem que equinos no Norte do Estado do Paraná, Brasil, podem ter sido expostos a uma rickettsia idêntica ou muito próxima a R. rickettsii.

Carrapatos (Acari: Ixodidae) em cães domésticos no Parque Estadual Serra de Caldas Novas, Goiás: considerações epidemiológicas / Ticks (Acari: Ixodidae) on domestic dogs in Serra de Caldas Novas State Park, Goiás: epidemiological aspects

Relatamos neste artigo a infestação por carrapatos de quatro cães domésticos perambulando no Parque Estadual Serra de Caldas Novas, em Goiás. Foram coletados 27 carrapatos (Acari: Ixodidae) ao longo de nove dias de novembro de 2008. Foram identificados nestes animais espécimes de Amblyomma cajennense, Amblyomma ovale, Amblyomma tigrinum e Rhipicephalus sanguineus além de ninfas de Amblyomma spp. Um dos canídeos analisados apresentava evidente mioclonia, sinal clínico característico da cinomose, uma doença viral grave e contagiosa de cães e de diversos animais selvagens. As espécies de carrapatos encontradas nos cães domésticos demonstram cabalmente o trânsito destes hospedeiros entre as áreas naturais e aquelas antropizadas, urbanas ou rurais. A mesma constatação ilustra a potencial difusão de doenças contagiosas ou daquelas transmitidas por vetores de cães para canídeos selvagens. As observações reforçam a noção de que para a conservação de espécies da fauna brasileira é necessário o controle e posse responsável de cães notadamente nos arredores de Unidades de conservação.

We herein report tick (Acari: Ixodidae) infestation of four domestic dogs wandering inside Serra de Caldas Novas State Park, Goiás. Twenty seven ticks were collected from these hosts along nine days in November 2008. Ticks were identified as adults of Amblyomma cajennense, Amblyomma ovale, Amblyomma tigrinum and Rhipicephalus sanguineus as well as Amblyomma spp. nymphs. One of the dogs displayed facial myoclonus, a symptom of canine distemper. Such disease is a serious viral and contagious disease of dogs and also of several wild animals. Overall tick species found on dogs clearly showed the transit of these hosts between the natural areas of the park and anthropic areas, urban or rural. Such situation illustrates the potential of dogs to transmit contagious and vector-borne diseases to wild canids. Our results reinforce the importance of control of dogs living free without responsible owner, to the Brazilian fauna conservation, particularly close to conservation units.

Carrapatos do gênero amblyomma (acari: ixodidae) e suas relações com os hospedeiros em área endêmica para febre maculosa no Estado de São Paulo / Ticks of genus Amblyomma (Acari: Ixodidae) and their relationship with hosts in endemic area for spotted fever in the state of São Paulo

Seven species of mammals and 36 of birds were investigated to determine the tick prevalence and intensity of infestation. The study was conducted at the Esalq/USP in Piracicaba municipality, State of São Paulo. It was collected 52 mammals and 158 birds parasitized by 12,418 ticks. Adult ticks (N= 7,343) were found on capybaras, while the immature were mainly collected on small mammals and birds. The main hosts for immatures in descending order were opossums (69.1 percent), capybara (24.4 percent) and black vultures (3.7 percent). Among the avifauna, the black vulture (Cathartidae) had the heaviest infestation (69.9 percent) followed by species of the Thamnophilidae and Turdidae families. Adult ticks collected on capybaras were A. cajennense (80.8 percent) and A. dubitatum (19.2 percent). Both tick species were also found on opossums corresponding to 72.4 percent and 27.6 percent, respectively. Due to easy capture and attractiveness for ticks, opossums could be used as bioindicators in Brazilian zoonotic areas with spotted fever. Considering the prevalence and also abundance of ticks, host attractiveness, proliferation and susceptibly for R. rickettsi infection, capybaras and opossums are the main amplifying hosts for this microorganism at the ESALQ/Campus, while horses, black vultures and stray cats act as secondary hosts.

Foram avaliadas 7 espécies da mastofauna e 36 da avifauna quanto à prevalência e intensidade de infestação por carrapatos na ESALQ/USP, no Município de Piracicaba, SP. Analisaram-se 52 indivíduos da mastofauna e 158 da avifauna, parasitados por 12418 carrapatos. Os exemplares adultos (N= 7343) foram encontrados em parasitismo nas capivaras enquanto que os imaturos foram, na maioria, coletados de pequenos mamíferos e aves. Os principais hospedeiros para as formas imaturas, em ordem decrescente, foram gambás (69,1 por cento), capivaras (24,4 por cento) e urubus (3,7 por cento). Entre a avifauna, o urubu apresentou o maior número de carrapatos com 69,9 por cento, seguido por indivíduos das famílias Thamnophilidae e Turdidae. Os carrapatos adultos encontrados em capivaras foram A. cajennense (80,8 por cento) e A. dubitatum (19,2 por cento). Ambas as espécies foram também coletadas em gambás, correspondendo a 72,4 por cento e 27,6 por cento, respectivamente. Pela facilidade de captura e atratividade de Amblyomma spp. o gambá pode ser usado como bioindicador de infestação em locais endêmicos para febre maculosa. Considerando os índices de parasitismo e prevalência bem como de abundância de carrapatos, susceptibilidade dos hospedeiros, proliferação e susceptibilidade para infecção por R. rickettsi, capivaras e gambás são potenciais hospedeiros amplificadores desse microrganismo no Campus da ESALQ, enquanto eqüídeos, urubus e gatos atuam como hospedeiros secundários.